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液相色譜檢測時，對照品為什么會“隱身”？這是一個常見且令人困擾的問題。以下從對照品、色譜條件、儀器、色譜柱四個方面為您詳細(xì)剖析原因及解決方案：

一、對照品問題
原因一：對照品未溶解或溶解不完全
解決方案：選擇合適的溶劑溶解對照品，或添加助溶劑（DMSO 或 DMF），確保對照品溶液澄清透明。

原因二：對照品配制濃度過低
解決方案：配制更高濃度的對照品溶液進(jìn)行測試（注意不要超過柱容量）或增大進(jìn)樣量。

原因三：對照品降解
解決方案：根據(jù)對照品性質(zhì)選擇合適的儲存條件或根據(jù)廠家說明書保存（如避光、避氧、低溫、干燥）。

二、色譜條件問題
原因一：檢測波長（檢測器）選擇不當(dāng)，對照品在該波長下無紫外吸收或有較弱吸收。
解決方案：根據(jù)對照品結(jié)構(gòu)式及其紫外吸收特征選擇合適的檢測波長（如無紫外吸收的化合物可選擇蒸發(fā)光散射檢測器）。

解決方案：調(diào)整流動相組成或比例，使其具有適當(dāng)?shù)谋Ａ裟芰Γㄈ缣岣哂袡C(jī)相比例以增強(qiáng)洗脫能力，使保留時間提前）。

三、儀器問題
原因一：進(jìn)樣針堵塞、進(jìn)樣閥故障或進(jìn)樣操作不當(dāng)?shù)葘?dǎo)致樣品未進(jìn)入系統(tǒng)或進(jìn)樣量不足
解決方案：檢查并沖洗進(jìn)樣針，檢查進(jìn)樣閥密封性；同時確認(rèn)操作的正確性。

原因二：流路異常，如某流路進(jìn)入氣泡，導(dǎo)致流速不穩(wěn)定或不泵液，從而不出峰。
解決方案：隨時觀察系統(tǒng)壓力的穩(wěn)定性，如壓力不穩(wěn)定需進(jìn)行排查維修

原因三：檢測器未開啟或檢測器故障，如檢測器的部件損壞、光路堵塞等會導(dǎo)致無法檢測到信號。
解決方案：對檢測器進(jìn)行檢查和維修?？梢酝ㄟ^檢測過往檢測正常的其他樣品輔助判斷。

四、色譜柱問題
原因一：色譜柱不適用，色譜柱類型與對照品性質(zhì)不匹配，導(dǎo)致樣品無法在柱內(nèi)保留或分離。如使用反相色譜柱分析強(qiáng)極性化合物，從而不保留快速流出色譜柱。
解決方案：根據(jù)對照品性質(zhì)選擇色譜柱，對于強(qiáng)極性或離子型化合物，可選擇親水相互作用色譜柱（HILIC）或離子交換色譜柱等。

原因二：色譜柱失效或者堵塞。色譜柱長時間不使用或正常損耗都可能導(dǎo)致柱效下降，對照品進(jìn)入后可能在柱頭積累無法洗脫流出。
解決方案：對色譜柱進(jìn)行沖洗和維護(hù)，并測試柱效。如果柱效下降嚴(yán)重，可考慮更換色譜柱。